[실험노트] 일반미생물학 실험 4. 식품 등의 재료로부터 미생물의 순수 분리

실험 제목 : 식품 등의 재료로부터 미생물의 순수 분리

 

1. 실험 목적

자연계나 식품 등의 실험 시료 중에서 각종 미생물이 함께 섞여서 존재하고 있으므로 어떤 미생물을 그 성질에 대해서 조사하거나 발효, 생산에 이용하기 위해서는 목적의 미생물을 우선 순수 분리하게 된다. 보통 시료를 그래도 사용하거나 적당히 희석하여 고체 배지 표면에 독립된 콜로니를 형성시켜 순수 분리하게 되고 목적의 균이 대단히 적거나 목적 이외의 균이 압도적으로 많아서 시료로부터 직접 분리하기가 어려울 때는 목적의 미생물이 증식하는데 가장 적합한 배지에 시료를 넣어 최적 조건하에서 배양하여 다른 미생물보다도 우선적으로 생육시켜 분리하는 경우가 많다. 이것을 집식배양 (enrichment culture)이라 한다. 이 방법으로 목적하는 미생물을 우세하게 번식시킬 수 있으나 다른 잡균들이 잔존하고 있으므로 순수 분리하여 우리가 원하는 미생물의 순수 배양을 얻을 수 있다.

 

2. 실험 원리

고체 배지 상에서 명확한 콜로니를 형성하는 미생물들의 순수 배양은 주로 평판법으로 간단하게 얻을 수 있다. 이러한 방법을 한천이나 다른 적당한 응고제를 사용하여 굳힌 영양 배지에 내부나 표면 위에서 개개의 생물들을 분리하여 고착시키는 것이다. 각각의 살아있는 미생물들은 성장하여 콜로니를 형성하며 이는 쉽게 옮겨질 수 있다.

도말 평판 (streak plate)은 일반적으로 가장 유용한 평판법이다. 멸균한 백금이를 적당히 희석한 미생물 현탁액에 넣은 뒤 굳은 한천 배지 위에 일련의 평행하고 중복되지 않는 선을 그어 도말한다. 접종원은 반복되는 도말에서 점진적으로 희석되어 처음에 도말한 부위에서는 합쳐진 상태로 자란다 하더라도 뒤에 도말한 부위에서는 잘 분리된 콜로니들이 그어진 선을 따라 자라게 된다.

3판 평판법은 3개의 배지에 하나의 백금이로 선을 긋는 방법으로 그어갈수록 백금이에는 조금의 미생물이 남음으로 마지막 배지에는 분리된 콜로니를 얻을 수 있다.

단말 평판법은 3개의 백금이로 1개의 배지에 중복되지 않는 선을 그어 순수한 콜로니를 얻는다.

 

3. 실험 재료

potato deztrose agar (PDA) for the cultivation and enumeratin of yeasts filamentons fungi (molds) from food

조성 (1L 당 patato infusion solids 4g, dextrose 20g, agar 15g, pH5.1+-0.2 at 25'c)

121'c( 15psi)에서 15 min 멸균 후 사용

MRS (배지 만든 사람의 이니셜을 땀) for the isolation and cultivation of lactovacillus species from clinical specimens, foods and dairy products

조성 (1L 당) protease peptone 10g, Beef extract 10g, Yeast extract 5g. dextrose 20g, polysorbate80 1g, ammonium citrate 2g, sodium acetate 5g, magnesium sulphate 0.1g, maganese sulphate 0.05g, dipatassium phosphate 2g, pH 6.5+-0.2 at 25'cc

121'c (15psi)에서 15 min 멸균 후 사용

 

4. 실험 방법

1) 화염 멸균한 백금이를 희석한 미생물 현탁액에 넣어 시료를 묻힌 후에 중복되지 않는 선을 긋는다.

2) 새로 멸균된 백금이를 1)과 두 번 정도 중복된 선을 그어서 조금만 묻힌 후 선을 긋는다.

3) 2)에서 사용한 백금이를 다른 면으로 바꿔서 선을 그어 주거나 다시 멸균된 백금이를 사용하여 2)와 중복된 선을 그어 조금만 묻힌 후 선을 긋는다.

 

5. 실험 결과

:PDA 배지와 TSA 배지에 각각 막걸리와 요구르트를 배야앟는 실험을 했다. 또 요구르트를 10배, 100배 희석한 것을 배양해보았다. 저번 실험에서 E.coli균을 배양한 것과 콜로니 모양과 크기가 다른 것을 확인할 수 있었다.

 

6. 고찰

:희석한 농도가 낮을수록 적은 양의 콜로니가 생성될 것이라고 예상하였다. 요거트 10배 희석액과 100배 희석액을 비교해보니 10배 희석액에서 더 많은 양의 콜로니가 생성되었음을 알 수 있다.

추가 조사) TSA배지는 Tryptone soy Agar의 약칭으로 콩에서 유래한 단백질과 트립톤이 들어간 배지이므로 당이 들어있는 바실러스를 배양하기 적합하다.

PDA배지는 Potato dextrose agar의 약칭으로 감자 전분과 포도당이 들어가 있고 약산성인 환경 때문에 효모가 잘 자란다. 젖산과 효모가 들어있는 막걸리를 배양하기 적합하다.

 

7. 참고 문헌

일반 미생물학 실험 교재

 

 

 

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